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El resultado es que la próstata se agranda. Flujo de orina en una próstata normal izquierda y agrandada derecha. En el peor de los casos, la HPB puede causar: una vejiga débil, un reflujo de orina que cause infecciones de la vejiga o de riñónun bloqueo completo del flujo de orina e insuficiencia renal.

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La próstata agrandada puede oprimir contra la vejiga y la uretra. Esto puede hacer lento o bloquear el flujo de orina. Algunos hombres pueden tener problemas en empezar el flujo de orina, aunque sientan la necesidad de orinar.

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Una vez que empiece el flujo de orina, puede ser difícil detenerlo. Los primeros síntomas de HPB se llevan muchos años en volverse problemas fastidiosos. Estos síntomas iniciales son una indicación de que hay que ver al doctor.

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Las sondas pueden marcarse con un marcador detectable, tal como, por ejemplo, un radioisótopo, un compuesto fluorescente, un compuesto bioluminiscente, un compuesto. Ausubel et al. Por ejemplo, pueden emplearse convenientemente metodologías de clonación con fagos lambda, que usan.

Los métodos para generar dichas moléculas son muy conocidos véase, por ejemplo, Sambrook et al. Los ejemplos de células hospedadoras eucariotas adecuadas.

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Protocols in Molecular Biology,anteriormente mencionado. Los vectores preferidos para la expresión en mamíferos incluyen, pero sin limitación, el vector pcDNA 3. También pueden emplearse otros diversos sistemas de expresión bien conocidos en la técnica. Para la generación de una forma secretada de proteína STEAP-1 recombinante pueden usarse construcciones de expresión que codifiquen un péptido líder análisis de rsa de próstata en vivo en fase con una secuencia codificante de STEAP Tal como se explica en el presente documento, la redundancia en el código genético permite la variación de las secuencias génicas de STEAP En particular, en la técnica se sabe que, especies hospedadoras específicas, a menudo tienen preferencias de codones específicas, y por lo tanto se puede adaptar la secuencia divulgada como se prefiera para un hospedador deseado.

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Se conocen modificaciones de secuencias adicionales para potenciar la expresión de proteínas en un hospedador celular. El contenido en GC de la secuencia se ajusta a niveles medios para un hospedador celular determinado, como se calcula por referencia a genes conocidos. Donde es posible, la secuencia se modifica para impedir que se produzcan estructuras secundarias previstas de ARNm en horquilla.

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Cell Biol. Los polipéptidos de STEAP-1 descritos en el presente documento incluyen: un polipéptido de STEAP-1 que tiene una secuencia mostrada en la Figura 2, una secuencia peptídica de un polipéptido de STEAP-1 como se muestra en la Figura 2, en la que T es U; teniendo la secuencia como se muestra en la Figura 2 al menos 10 nucleótidos contiguos de un polipéptido; análisis de rsa de próstata en vivo teniendo la secuencia como se muestra en la Figura 2 al menos 10 péptidos contiguos.

XIX un péptido que comprende una, dos, tres, cuatro o cinco de las siguientes características, análisis de rsa de próstata en vivo un oligonucleótido que codifica dicho péptido:.

Tal como se usa en el presente documento, se entiende que un intervalo indica específicamente todas las posiciones unitarias del mismo. En las comparaciones de secuencias de proteínas, cada uno de los términos, similitud, identidad y homología tiene un significado distinto como se aprecia en el campo de la genética.

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Las proteínas de la invención pueden comprender 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 sustituciones conservativas. Por ejemplo, la glicina G y la alanina A pueden ser intercambiables frecuentemente, como pueden serlo la alanina A y la valina V.

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La metionina Mque es relativamente hidrófoba, puede intercambiarse frecuentemente por leucina e isoleucina, y a veces por valina. La lisina K y la arginina R se intercambian frecuentemente con leucina e.

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Lubert Stryer ed Stanford University ; Henikoff et al. Las variantes de STEAP-1 pueden fabricarse usando métodos conocidos en la técnica, tales como mutagénesis de sitio dirigido, mutagénesis mediante.

La mutagénesis de sitio dirigido Carter et al.

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Acids Res. Un polipéptido deja de. Véase, por ejemplo, Nair et al.

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Immunol 12 :. Las columnas de la Tabla XIX enumeran 1 la abreviatura del nombre del motivo. Acta 1 ; Raju et al.

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Por ejemplo, se puede sustituir un resto perjudicial a favor de cualquier otro resto, tal como un resto preferido como se define en la Tabla IV; sustituir un resto menos preferido por un resto preferido como se define en la Tabla IV; o sustituir un resto preferido de origen análisis de rsa de próstata en vivo por otro resto preferido como se define en la Tabla IV.

Las sustituciones pueden producirse en posiciones de anclaje primario o en otras posiciones en un péptido; véase, por ejemplo, la Tabla IV. Varias referencias reflejan la técnica con respecto a la identificación y generación de epítopos en una proteína de.

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Los casos preferidos no contienen inserciones, deleciones o sustituciones bien dentro de los motivos o dentro de las secuencias de intervención de los polipéptidos. En una realización, una proteína de STEAP-1 soluble, funcional o un fragmento de la misma conserva la.

Los polipéptidos relacionados con la proteína STEAP-1 que contienen estructuras particularmente interesantes. Por ejemplo, utilizando el método de Hopp, T.

Usando el método de Kyte, J.

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Protein Res. Los perfiles de giro Beta pueden generarse, y los fragmentos peptídicos inmunogénicos pueden identificarse usando el método de Deleage, G. Ilustrando esto, se predijeron epítopos.

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La unión real de péptidos a un alelo de HLA puede evaluarse a través de la estabilización de la expresión de HLA en la línea celular T2 análisis de rsa de próstata en vivo procesamiento antigénico defectuoso véase, por ejemplo, Xue et al.

STEAP-1 puede expresarse convenientemente en células tales como células T transfectadas con un vector de. La STEAP-1 con etiqueta de HIS secretada en el medio de cultivo puede purificarse, por ejemplo, en una columna de níquel usando técnicas convencionales.

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Otro tipo de modificación covalente de un polipéptido STEAP-1 comprende alterar el patrón de glucosilación nativo de una proteína de la invención. Dicha molécula quimérica puede sintetizarse química o recombinantemente.

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Una molécula quimérica puede tener una proteína de la 35 invención fusionada con otro antígeno asociado a tumores o fragmento del mismo. Una molécula. La etiqueta epitópica generalmente se coloca en el extremo amino o carboxilo de una proteína STEAP Como alternativa, la molécula quimérica puede comprender una fusión de una proteína relacionada con STEAP-1 con una inmunoglobulina o una región particular de una inmunoglobulina.

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Para una forma. Las fusiones de IgG incluyen preferentemente la sustitución de una forma soluble dominio transmembrana delecionado o inactivado de un polipéptido de STEAP-1 en lugar de al menos una región variable dentro de una molécula de Ig.

Para la producción de fusiones de.

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Las proteínas de la invención tienen una serie de distintos usos específicos. Normalmente, se usan polipéptidos de regiones específicas de una proteína STEAP1 para evaluar la presencia de perturbaciones tales como deleciones, inserciones, mutaciones puntuales etc.

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Los ensayos ejemplares utilizan. Los anticuerpos preferidos se unen específicamente a una proteína relacionada con STEAP-1 análisis de rsa de próstata en vivo no se unen o se unen débilmente a péptidos o proteínas que no son proteínas relacionadas con STEAP Estos Dietas faciles se realizan en diversos formatos de ensayos inmunológicos bien conocidos en la técnica, que incluyen pero sin limitación, diversos tipos de radioinmunoensayos, ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas ELISAy ensayos.

Los ensayos inmunológicos sin anticuerpos de la presente invención también comprenden ensayos inhibidores o estimuladores de inmunogenicidad con células T así como ensayos de unión al complejo mayor de histocompatibilidad MHC.

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En la técnica se conocen bien diversos métodos para la preparación de anticuerpos. Por ejemplo, pueden.

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Press, Eds. Los perfiles de Hidrofilicidad pueden generarse usando el método de Hopp, T. Los perfiles de Hidropaticidad pueden generarse usando el método de Kyte, J.

Los perfiles de Flexibilidad Promedio pueden generase usando el método de Bhaskaran R. Los perfiles de giro Beta pueden generarse usando el método de Deleage, G.

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Por lo tanto, se contempla cada región identificada mediante cualquiera de estos programas o métodos. Los métodos para preparar una proteína o un polipéptido para su uso como un inmunógeno son muy conocidos en la técnica.

También se conocen bien en la técnica métodos para preparar conjugados inmunogénicos de una proteína con un vehículo, tal como BSA, KLH u otra proteína vehículoa. En algunas circunstancias, se usa la conjugación directa usando, por ejemplo, reactivos de carbodiimida; en otros casos son eficaces los reactivos de unión, tales como los suministrados por Pierce Chemical Co.

La administración de un inmunógeno de STEAP-1 se realiza a menudo mediante inyección análisis de rsa de próstata en vivo lo largo de un periodo de tiempo adecuado y con el uso de un adyuvante adecuado, tal como se sabe en la técnica. Durante el régimen de inmunización, se pueden tomar títulos de anticuerpos para determinar la idoneidad de la formación de anticuerpos.

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Por ejemplo, líneas celulares inmortalizadas que segregan un anticuerpo monoclonal deseado se preparan usando la tecnología convencional del hibridoma de Kohler y Milstein o modificaciones que inmortalizan las células B productoras de anticuerpos, tal como se conoce generalmente. Análisis de rsa de próstata en vivo líneas celulares inmortalizadas que segregan los anticuerpos deseados se exploran mediante inmunoensayos en los que el antígeno es una proteína relacionada con STEAP Cuando se identifica el cultivo apropiado de células inmortalizadas, las células pueden expandirse y los anticuerpos pueden producirse a partir de cultivos in vitro o a partir de fluido ascítico.

Los anticuerpos o fragmentos también pueden producirse a través de medios recombinantes. Las regiones que se unen específicamente a las regiones deseadas de una proteína STEAP-1 también pueden producirse en el contexto.

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También pueden producirse anticuerpos humanizados o humanos de STEAP-1 y se prefieren para su uso en contextos terapéuticos. Véase también, Carter et al.

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Los métodos para producir anticuerpos monoclonales completamente humanos incluyen los métodos de presentación de fagos y transgénicos para una revisión, véase Vaughan et al. Los anticuerpos monoclonales completamente humanos de STEAP-1 pueden generarse usando tecnologías de clonación que emplean genotecas combinatorias de gran tamaño de genes de IgG humana es decir, presentación de fagos Griffiths y Hoogenboom, Building an in vitro immune system: human antibodies from phage display libraries.

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Este método impide la manipulación in vitro que se requiere en la tecnología de presentación de fagos y produce eficazmente anticuerpos humanos. Un anticuerpo de STEAP-1 o fragmento del mismo puede marcarse con un marcaje detectable o conjugarse con una segunda molécula. Los anticuerpos homodiméricos pueden generarse también mediante técnicas de entrecruzamiento conocidas en la técnica por ejemplo, Wolff et al.

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Para entender el valor y la eficacia de las composiciones de la invención que inducen respuestas inmunitarias celulares, se proporciona una breve revisión de la tecnología relacionada con la inmunología. Immunol, 7:; Germain, R.

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Las células T específicas para el péptido se vuelven activas durante este tiempo y se detectan usando, por ejemplo, un ensayo de liberación de una linfocina o de 51Cr que implica células diana sensibilizadas con péptidos.

Varias semanas después de la inmunización, se extraen los esplenocitos y análisis de rsa de próstata en vivo cultivan in vitro en presencia del péptido de ensayo durante aproximadamente una semana.

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Las células T específicas del 51Cr. Al final del periodo de cultivo, la actividad de las células T se detecta usando ensayos que incluyen la liberación de 51Cr que implican dianas sensibilizadas con péptidos.

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Las secuencias genómicas clonadas pueden usarse después para generar animales transgénicos que contengan células que expresen ADN que codifica STEAP Los métodos para generar animales transgénicos, en particular animales tales como ratones o ratas, se.

Normalmente, células particulares deberían estar dirigidas para la incorporación del transgén de STEAP-1 con potenciadores específicos de tejido.

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Dichos animales pueden usarse como animales de ensayo para reactivos que se cree que confieren protección, por ejemplo, de afecciones patológicas asociadas con su sobreexpresión. De acuerdo con este aspecto de la invención, un animal se trata con un reactivo y una incidencia reducida de una afección patológica, en análisis de rsa de próstata en vivo con los animales no tratados que.

Una porción del ADN genómico que codifica STEAP-1 puede delecionarse o reemplazarse por otro gen, tal como un gen que codifica un marcador de selección, que puede usarse para controlar la integración.

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Las células seleccionadas se inyectan después en un blastocisto de un animal por ejemplo, un ratón o una rata para formar quimeras de agregación véase, por ejemplo, Bradley, in Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells: A Practical Approach, E.

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Robertson, ed. Después, un embrión quimérico puede implantarse en un animal adoptivo hembra seudogestante adecuado, y llevar a término el embrión para crear un animal genosuprimido. La descendencia portadora de ADN recombinado análisis de rsa de próstata en vivo manera homóloga en sus células germinales puede identificarse por técnicas convencionales y usarse para criar animales en los que todas las células del animal contienen ADN recombinado de manera homóloga.

Los animales genosuprimidos pueden. El perfil de expresión de STEAP-1 hace de este un marcador diagnóstico para enfermedades metastatizadas.

La invención proporciona ensayos para detectar la presencia de una proteína STEAP-1 en un tejido u otra muestra. Un ensayo para detectar una. Como alternativa, un ensayo para la identificación de una célula que expresa un gen STEAP-1 comprende detectar la presencia de análisis de rsa de próstata en vivo proteína relacionada con STEAP-1 en la célula o secretada por la célula. Se conocen bien en la técnica diversos métodos para la detección de proteínas y se emplean para la detección de proteínas relacionadas con STEAP-1 y células que expresan proteínas relacionadas con STEAP La identificación de una molécula o de un agente biológico que inhibe la expresión o sobreexpresión de STEAP-1 en células cancerosas es de valor terapéutico.

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Estos incluyen, pero sin limitación, la localización de productos génicos expresados incluyendo la localización de células que expresan STEAP-1 así como el nivel, y la actividad biológica de los productos génicos expresados tal como ARNm, polinucleótidos y polipéptidos de STEAP1. Los protocolos típicos para evaluar el estado de un gen de STEAP-1 y de los productos génicos se análisis de rsa de próstata en vivo, por ejemplo, en Ausubel et al. Por consiguiente, un aspecto de la.

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Tal como se describe anteriormente, el estado de STEAP-1 en una muestra biológica puede examinarse mediante diversos procedimientos bien conocidos en la técnica. Este examen puede proporcionar pruebas de análisis de rsa de próstata en vivo del crecimiento celular, por ejemplo, cuando se encuentran células que expresan STEAP-1 en una muestra biológica que normalmente no contiene dichas células.

La presencia de productos génicos aberrantes de STEAP-1 en la muestra de ensayo respecto a la muestra normal proporciona una indicación de la presencia de la desregulación del crecimiento. Por ejemplo, dicho método comprende determinar el nivel de la proteína STEAP-1 que se expresa en las células en una muestra de tejido de ensayo y comparar el nivel determinado de ese modo con el nivel de STEAP-1 expresado en una muestra normal correspondiente.

Los anticuerpos o compañeros de unión de STEAP-1, capaces de detectar la expresión de la proteína STEAP-1, se usan en varios formatos de ensayo bien conocidos en la técnica para este fin. Estas perturbaciones pueden incluir. Por ejemplo, una mutación en la secuencia de STEAP-1 Adelgazar 50 kilos ser indicativa de la presencia análisis de rsa de próstata en vivo promoción de un tumor.

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Por lo tanto, dichos ensayos tienen un valor diagnóstico y predictivo en el que una mutación de STEAP-1 indica una posible pérdida de función o un aumento en el crecimiento tumoral.

Adicionalmente, se puede examinar el estado de metilación de un gen de STEAP-1 en una muestra biológica. Biomarkers Prev.

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Cancer 76 6 : En la técnica se conocen diversos ensayos para examinar el estado de metilación de un gen. Por ejemplo, en enfoques de hibridación de Southern, se pueden utilizar enzimas de restricción sensibles a metilación que no pueden escindir secuencias que contienen sitios de CpG metilados para evaluar el estado de metilación de islas de CpG. También pueden encontrarse protocolos que implican interferencia a la metilación, por ejemplo, en Current Protocols Análisis de rsa de próstata en vivo Molecular Biology, Unidad 12, Frederick M.

La amplificación génica se mide en una muestra directamente, por ejemplo, mediante transferencia de Southern o de Northern convencional para cuantificar la transcripción del ARNm Thomas,Proc.

En el presente documento también se describe una evaluación de la susceptibilidad que un individuo tiene para.

En el presente documento también se describen métodos para observar la progresión de una malignidad en un individuo a lo largo del tiempo. Los enfoques diagnósticos anteriores pueden combinarse con uno cualquiera de una amplia variedad de protocolos pronósticos y en la técnica se conocen protocolos de diagnóstico.

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Puede utilizarse una amplia variedad de factores. Los métodos para observar una coincidencia entre la expresión de un gen de STEAP-1 y los productos génicos de.

Puede que también le pregunte acerca de posibles factores de riesgo, incluyendo sus antecedentes familiares. Esto puede incluir tacto rectal DRE.

En un ensayo inmunohistoquímico de tejido biopsiado, pueden usarse anticuerpos policlonales o monoclonales reactivos específicamente con la proteína STEAP-1 de tipo silvestre. En dichos sistemas, las moléculas interaccionan y reconstituyen un factor de transcripción que dirige la expresión de un gen indicador, después de lo cual se ensaya la expresión del gen indicador. En la técnica también se dispone de algoritmos para realizar análisis de rsa de próstata en vivo basadas en genoma de la función de las proteínas véase, por ejemplo, Marcotte, et al.

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Los péptidos codificados por las bibliotecas se expresan como proteínas de fusión de proteínas de recubrimiento de bacteriófagos, las partículas de bacteriófagos se exploran después contra la proteína o proteínas de STEAP Por consiguiente, de este modo se identifican péptidos que tienen una amplia variedad de usos, tales como reactivos terapéuticos, pronósticos o diagnósticos análisis de rsa de próstata en vivo ninguna información anterior sobre la estructura de la molécula ligando o receptora esperada.

Las bibliotecas peptídicas típicas y los métodos de exploración que pueden usarse para identificar partículas que interaccionan con secuencias de la proteína STEAP-1 se divulgan, por ejemplo, en las.

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Dichas interacciones pueden examinarse usando técnicas de inmunoprecipitación véase, por ejemplo, Hamilton B. Como alternativa, pueden usarse anticuerpos contra etiquetas de His en una línea celular modificada por ingeniería genética para expresar fusiones de STEAP-1 y una etiqueta de His vectores anteriormente mencionados.

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El complejo inmunoprecipitado puede examinarse para determinar la asociación de proteínas mediante procedimientos tales. Las moléculas pequeñas y los ligandos que interaccionan con STEAP-1 pueden identificarse, por ejemplo, a través de dichos ensayos análisis de rsa de próstata en vivo exploración.

Por ejemplo, pueden identificarse moléculas pequeñas que interfieren con la función proteica, incluyendo moléculas que interfieren con la capacidad de STEAP-1 para mediar la fosforilación y desfosforilación, interacción con moléculas de ADN y ARN como una indicación de regulación del ciclo celular, señalización de segundos mensajeros o tumorogénesis.

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Por ejemplo, pueden usarse células modificadas por ingeniería genética para expresar una proteína de fusión de STEAP-1 y una proteína de unión a ADN para coexpresar una proteína de fusión. Las células que expresan el gen indicador se seleccionan y se identifica la molécula pequeña desconocida o el ligando desconocido. Análisis de rsa de próstata en vivo como se contempla en el presente documento, STEAP-1 funciona como un factor transcripcional implicado en la activación de genes promotores de tumores o genes represores que bloquean la tumorogénesis.

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Estos enfoques terapéuticos generalmente se encuentran en dos clases. Una clase comprende diversos métodos para inhibir la unión o asociación de una proteína STEAP-1 con su compañero de unión o con otras proteínas.

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Tanto las biopsias como las cirugías de la próstata aumentan también la concentración del PSA. Otro factor que complica el asunto es que los estudios conducidos para establecer un grado normal de los valores del PSA se han realizado principalmente en poblaciones de hombres blancos. Aunque varía la opinión de los expertos, no hay un consenso claro análisis de rsa de próstata en vivo del umbral óptimo del PSA para recomendar una biopsia de la próstata en hombres de cualquier raza o grupo étnico.

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Si la concentración del PSA sigue aumentando o si se detecta una protuberancia sospechosa en el examen digital del recto, el médico podría recomendar otras pruebas para determinar la naturaleza del problema.

Durante este procedimiento, se insertan agujas huecas en la próstata y luego se retiran. Por lo general, las agujas se insertan por la pared del recto biopsia transrectal.

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